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如何正确选择PCR耗材才能让实验更顺利?

2022/04/22

Q1

PCR耗材为什么一般都是PP材质的?

因为PCR/qPCR耗材通常会与试剂或样品直接接触,而聚丙烯(PP)材质是生物学惰性材料,表面不易于粘附生物分子,且有着良好的化学耐性,及温度耐受性(可高温高压灭菌 121 ℃ ,也可以承受热循环过程中的温度变化)。



Q2

不同体积的PCR管/板,该怎么选?

单管/联管:0.5 mL,0.2 mL(标准),0.1 mL(低容)

96 孔板:0.2 mL(标准),0.1 mL(低容)

384 孔板:0.02 mL

PCR管的体积大多数都可以满足PCR反应的要求。但是在满足实验要求的基础上,优先选用低容管。低容耗材的设计最大程度减少了反应体系上方的空间,降低了蒸发的影响并提高热传导率。

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Q3

PCR管为什么有平盖和凸盖,该怎么选?

平盖:可为qPCR提供精确的荧光信号传递,便于书写标记。

凸盖:与PCR仪热盖接触,减少压力引起的反应管变形,更好的防止液体蒸发。但会影响荧光信号传递,无法应用于qPCR实验。

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Q4

不同颜色的 PCR 管/板,该怎么选?

对于普通的PCR反应选用透明的就可以。在实时PCR反应时,白管的灵敏度和一致性相对更高。白色管壁能够阻止荧光穿过管壁和折射,进而防止荧光传至加热模块,被模块吸收或发生不一致反射等情况。相比于透明管,在白管的顶端能够采集到更强,更聚焦的荧光信号。

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Q5

PCR板/管材质是厚点的稳定性更好吗?

不是的。PCR耗材的管壁厚度要均一,才能提供一致的热传导。超薄管壁较标准版薄50%,可进一步减少热屏障,带来更快更好的反应效果。


Q6

96孔板,无裙边和半裙边,该怎么选呢?

裙边的更多在于为工业化、自动化批量处理提供便利,与机械臂的结合。在常规科研实验室中可能不太需要,使用无裙边板即可。

无裙边板:兼容大多数的PCR仪或qPCR仪,易于剪裁,但不适用于自动化应用。

半裙边板:可适配标签或应用条码,及自动化应用,且有着较好的移液稳定性。

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Q7

96孔/384孔板,为什么有个切角呢?

切角:PCR板的切角位置选择取决于适配仪器要求,便于定位。

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PCR板选好后,还需选一张好的PCR膜来密封,才能保证获得准确可靠的PCR数据,这对实时PCR非常重要!

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